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實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀有哪些結(jié)構(gòu)組成?

更新時(shí)間:2022-09-20      點(diǎn)擊次數(shù):2311
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)也稱 QPCR,是指在DNA 擴(kuò)增反應(yīng)中,以熒光化學(xué)物質(zhì)測單次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR主要由樣品載臺、基因擴(kuò)增熱循環(huán)組件、微量熒光檢測光學(xué)系統(tǒng)、微電路控制系統(tǒng)、計(jì)算機(jī)及應(yīng)用軟件組成。其中基因擴(kuò)增熱循環(huán)組件工作原理與傳統(tǒng)基因擴(kuò)增儀大致相同,不同廠家不同型號的產(chǎn)品分別采用空氣加熱、壓縮機(jī)制冷、半導(dǎo)體加熱制冷等工作方式。微量熒光檢測系統(tǒng)由熒光激發(fā)光學(xué)部件、微量熒光檢測部件、光路、控制系統(tǒng)組成。

常用的熒光激發(fā)方式有兩種:鹵鎢燈和LED;熒光檢測元件常用兩種方式:光電倍增管和冷光CCD攝像機(jī),光單色元件有濾光片和光柵。在實(shí)時(shí)PCR擴(kuò)增過程中,熒光信號被收集,轉(zhuǎn)化為成為擴(kuò)增和熔解曲線。具體數(shù)據(jù)就是基線,熒光閾值和Ct值。

CT值: qPCR擴(kuò)增過程中,擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光信號達(dá)到設(shè)定的熒光閾值時(shí)的所對應(yīng)的擴(kuò)增循環(huán)數(shù)(Cycle Threshold)。
基線:擴(kuò)增曲線的水平部分(背景信號過高,可獨(dú)立設(shè)置)
在PCR早期,擴(kuò)增處于理想情況下,循環(huán)數(shù)較少,產(chǎn)物積累少,產(chǎn)生熒光的水平不能與熒光本底背景明顯地區(qū)別,之后熒光的產(chǎn)生增加進(jìn)入指數(shù)期。
可以在PCR反應(yīng)剛處于指數(shù)期的某一點(diǎn)上來檢測PCR產(chǎn)物的量,以此作為“一定產(chǎn)物量”,并且由此來推斷模板最初的含量。一定產(chǎn)物量對應(yīng)的熒光信號強(qiáng)度,也就是熒光閾值。
 





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