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核酸提取的好壞直接影響檢測(cè)結(jié)果的有效性

更新時(shí)間:2023-02-13      點(diǎn)擊次數(shù):1093
核酸是由許多核酸聚合成的生物大分子化合物,為生命的最基本物質(zhì)之一。核酸是分子生物學(xué)的基礎(chǔ),而核酸提取是核酸檢測(cè),乃至于整個(gè)分子行業(yè)繞不過去的門檻,很多時(shí)候一份樣本的核酸提取的好壞直接決定了檢測(cè)結(jié)果的有效性。

常見核酸提取純化方法:

1、苯酚氯仿抽提法
苯酚作為蛋白變性劑,同時(shí)抑制了DNase的降解作用,用苯酚處理勻漿液時(shí),由于蛋白與DNA聯(lián)結(jié)鍵已斷,蛋白分子表面又含有很多極性基團(tuán)與苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。離心分層后取出水層,多次重復(fù)操作,再合并含DNA的水相,利用核酸不溶于醇的性質(zhì),用 乙醇沉淀DNA。此時(shí)DNA是十分粘稠的物質(zhì),可用玻璃慢慢繞成一團(tuán),取出。此法的特點(diǎn)是使提取的DNA保持天然狀態(tài)。

2、水抽提法

利用核酸溶解于水的性質(zhì),將組織細(xì)胞破碎后,用低鹽溶液除去RNA, 然后將沉淀溶于水中,使DNA充分溶解于水中,離心后收集上清液,在上清中加入固體氯化鈉調(diào)節(jié)至2. 6M. 加入2倍體積95%醇,立即用攪拌法攪出,然后分別用66% , 80%和95%乙醇以及丙銅洗滌,最后在空氣中干燥,即得DNA樣品,此法提取的DNA中蛋白質(zhì)含量較高,故一般不用,為除蛋白可將此法加以改良,在提取過程中加入SDS。

3、離心柱純化

此種方法是利用核酸表面會(huì)覆蓋一層由水分子構(gòu)成的薄膜,在高鹽環(huán)境下,這層親水膜會(huì)遭到破壞從而核酸可被吸附在離心柱上,而其他雜質(zhì)如蛋白質(zhì)、代謝產(chǎn)物等則會(huì)被離心沉淀與核酸分離。最后通過洗脫,將核酸從吸附膜上脫離,即可得到純化后的核酸。離心柱純化也是的試劑盒提取中廣泛的使用方法。

4、磁珠法

一般用于自動(dòng)化提取,生物磁珠是一種新型的功能化固體載體,其表面包被有活性基團(tuán),可以與多種生物活性物質(zhì)發(fā)生偶聯(lián),兼具有液體的流動(dòng)性和固體磁性材料等特點(diǎn),在外磁場(chǎng)的作用下可以定向移動(dòng)和栠中,當(dāng)撤去外磁場(chǎng)后,稍加振蕩或抽吸又可均勻分散于液體中,從而使固液相的分離變的十分快捷方便,通過簡(jiǎn)單的洗脫可以得到純度很高的靶向物質(zhì)。
 

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